[其他] 基因定点突变的问题求教 基因, 突变, 求教

我不是洋葱

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各位酷友大侠： 你们好，我最近遇到一个问题。详细如下： 我打算对某个基因进行定点突变，去除基因中间某个地方的三个碱基。我以前也做过突变，就是通过设计引物，（把要突变的点设计在引物中），用over-lap PCR（重叠PCR） 的方法进行单点突变，非常成功。但是这次，这三个碱基非常顽强，虽然引物中没有，通过over-lap PCR之后，它仍然存在。我仔细分析这三个碱基的上下游，发现它的上下游 附近段和它一样，就是说，比如，我要去除GAC三个碱基，它的上下游附近段基本上都是GAC，设计这样的引物，可能在PCR中就错配了。如果是这样的问