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[PCR引物设计] 这个PCR引物怎么扩增不出条带呀？

宜城有悔

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tT
发表于 10-1-26 20:41 | 只看该作者

[PCR引物设计] 这个PCR引物怎么扩增不出条带呀？

扩增, 引物, PCRPCR, 引物, 扩增
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本帖最后由 宜城有悔 于 10-1-26 20:48 编辑 因为要做重叠pcr，我需要先扩增人VEGF165的cDNA全长序列（不含终止密码子）. CGGGCCCTCTAGACTCGAGCGGCCGCCACTGTGCTGGATATCGAATTCCGGGCCTCCGAAACCATGAACTTTCTGCTGTCTTGGGTGCATTGGAGCCTTGCCTTGCTGCTCTACCTCCACCATGCCAAGTGGTCCCAGGCTGCACCCATGGCAGAAGGAGGAGGGCAGAATCATCACGAAGTGGTGAAGTTCATGGATGTCTATCAGCGCAGCTACTGCCATCCAATCGAGACCCTGGTGGACATCTTCCAGGAGTACCCTGATGAGATCGAGTACATCTTCAAGCCATCCTGTGTGCCCCTGATGCGATGCGGGGGCTGCTGCAATGACGAGGGCCTGGAGTGTGTGCCCACTGAGGAGTCCAACATCACCATGCAGATTA
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饮其泉时思其源，学其成时念吾师！
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宜城有悔

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发表于 10-1-27 12:38 | 只看该作者
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自己顶一下，已排除体系原因和操作失误，不知是不是模板问题，正在排除。
饮其泉时思其源，学其成时念吾师！
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zp4321

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发表于 10-1-29 21:36 | 只看该作者
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引物没问题，基因也没有什么特殊的。再查一下吧。
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rkrl001

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发表于 10-2-8 16:08 | 只看该作者
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P不出来的原因很多，可能不是引物的原因吧。
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jackey

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发表于 10-2-22 16:58 | 只看该作者
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加一个阳性对照，扩个内参吧！
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zijing

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发表于 10-3-14 19:20 | 只看该作者
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我之前也遇到过类似的问题，退火温度都降到45度了，仍是一条带也没有！ 后来逐步验证，是模版不匹配，估计你的问题也在这吧，再摸索一下试试吧！
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