wyat1984

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我们实验室都是用新鲜菌液+50%灭菌甘油1：1混匀，终浓度25%甘油，-80度保存的。菌体可以多离心收集一点。 冻干保存用的脱脂牛奶110度15分钟灭菌。 其实很多时候大家要的是质粒而不是菌，一般的DH5,JM109之类的大家都有。为什么不抽成质粒保存呢？-80度基本不会降解。

保藏中心

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您好！感谢您的支持。 “其实很多时候大家要的是质粒而不是菌，一般的DH5,JM109之类的大家都有。为什么不抽成质粒保存呢？-80度基本不会降解。”保藏中心的质粒都是抽提保存的，我想您有些误解了，现出现的是菌株的保藏问题而不是质粒的保藏问题，DH5,JM109之类的菌株是很多人都有，但也还有其它不少的菌株较少的。

nfu03200

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我这里一般是需要用到质粒的大肠杆菌用15%的甘油1：1和菌液混合，酵母用的是30%的甘油和菌液1：1混合，然后放在-80度冰箱中保存，效果很好

保藏中心

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我这里一般是需要用到质粒的大肠杆菌用15%的甘油1：1和菌液混合，酵母用的是30%的甘油和菌液1：1混合，然后放在-80度冰箱中保存，效果很好 nfu03200 发表于 09-3-15 10:45 质粒的大肠杆菌用15%的甘油1：1和菌液混合,甘油的终浓度7.5％，感觉挺低的，请问您那里-80度保存大概能保存多长时间？

ferraricyn

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本帖最后由 ferraricyn 于 09-3-20 15:21 编辑 个人觉得脱脂牛奶冻干的方法保藏效果较好，我们的霉菌就是这么弄 哦，看了一下，原来都是细菌保藏，那还是加甘油保护，液氮速冻，-70保藏吧，呵呵 另外，有的冻干机是有封口功能的，冻干机也是在无菌室内操作的，冻干后可以取出封口，同样是无菌条件下操作的

yueyuetby

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我们实验室的保存方式是，按3：1的比例加入菌液和甘油，一定要混匀，然后放在-70度冰箱中保存。

rcm001

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本帖最后由 rcm001 于 09-3-29 21:23 编辑 您好！您上传的资料中介绍了好多种菌种保藏的方法，很受用，十分感谢您的帮助和支持！ 但我有一些疑问想请教下： 1/您上传的PPT中讲到“在作低温保藏时，注意尽量不损伤细胞。在缓慢冷冻时，胞外基质一般较快结冰而 ... 保藏中心 发表于 09-2-24 09:50 不是啊！细菌保存最好要快速冷冻，我在PASTEUR作博士后时他们的PROTOCOL都是用液氮先浇在有菌液＋冷冻液的EP管上，冻好后放－80度冰箱，可以保存10年左右。冷冻液配方需再找找再给你，印象中不是简单的甘油溶液。 动物细胞当然是要缓慢冷

rcm001

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本帖最后由 rcm001 于 09-3-29 21:52 编辑 如您所说，冷冻干燥法该法操作比较烦琐，技术要求较高，且需要冻干机等设备，不适合酷友频繁的求助菌种。但考虑到一个菌株的传代问题，菌种传代次数对菌株特性的影响？我有这样的想法：每个菌种用冷冻干燥法保藏一些 ... 保藏中心 发表于 09-2-20 23:33 冻干保护剂是先配成溶液，再用0.22um的滤膜过滤除菌，再按比例加到培养到对数生长期的菌液；真正的冻干机操作当然不会染菌了，进去的空气都是经过滤的；真空封融菌种管是把冻好的菌种管口套在抽气机上，抽至一定真空度，如6pa，在喷灯上封融

保藏中心

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不是啊！细菌保存最好要快速冷冻，我在PASTEUR作博士后时他们的PROTOCOL都是用液氮先浇在有菌液＋冷冻液的EP管上，冻好后放－80度冰箱，可以保存10年左右。冷冻液配方需再找找再给你，印象中不是简单的甘油溶液。 ... rcm001 发表于 09-3-29 21:20 非常感谢！期待......

rcm001

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冷冻液配方来了：--翻了半天，终于找到了，是HOGNESS，哈哈－－excellent for E.coli preservation 10X Hogness Modified Freezing Medium: Solution A: 5 mM MgSO4x4 H2O, 20 mM Sodium Citrate,         85 mM (NH4)2SO4, 45 % Glycerin. Solution B: 0,66 M KH2PO4, 1,3 M K2HPO4 Dilute "B" 4X with "A" = 10 x HMFM (e.g., 1B + 4A) 例子： 10 x HMFM (Hogness Modified Freezing Medium) (For freezing of bacteria) Solution A MgSO4.7 H2O 0.9 g Na3-citrate