DNA重组主要实验

的主要内容：
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• DNA重组技术常用酶
• 酶切基础知识
• 双酶切反应
• 影响限制性内切酶活性的因素
• 电泳洗脱法回收酶切DNA片段
• 连接酶简介
• 连接试验
• 连接反应的影响因素
• 感受态细胞常用的制备方法
• 高效感受态细胞制备
• Inoue法制备大肠杆菌超级感受态细胞
• 感受态细胞转化效率的检验
• DNA的转化
• 质粒的酵母直接转化
• 感受态细胞转化操作流程及提高转化效率的建议
• 几种常见转化细胞及转化技术
• 转化要点及疑难解析
• 转化子DNA的鉴定
• 重组子的筛选
• DNA重组实验常见问题分析

2 e- f' U( {& k  K  N0 S声明：
  w3 z0 f1 `8 c. i8 c; p1、 本篇涉及的资源主要源于网络及相关书籍，由酷友搜集、分析、整理、审改，供大家学习参考用，如有转载、传播请注明源于基因酷及本书的工作人员；若本书侵犯了您的版权或有任何不妥，请Email genecool@126.com告知。
9 A' S/ e5 o9 s9 K9 P- s2、 由于我们的学识、经验有限，本书难免会存在一些错误及缺陷，敬请不吝赐教：请到基因酷论坛（www.genecool.com/bbs）本篇对应的专题跟贴指出或Email genecool@126.com。3 T- o; q) z; ?' V
致谢：
. j7 X0 O9 P( Z/ \# P2 R整理者：WANZHAN  审改者：小宝、纤夫、caterpillar、kaige88# i, H# E, I9 G! u5 K4 c  ?' B7 x
主要参考资料：《分子克隆试验指南》: [5 B. g+ a) F7 A

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电泳洗脱法回收酶切DNA片段

5 W: G  S0 @. |! P  q1、 用合适的酶切割DNA并电泳。5 Z5 T, Z: O8 d1 g$ J
2、 于紫外灯下从凝胶上切下所要的DNA带，装入含1×TBE缓冲液的透析代内，用夹子封好袋口，并检查有无漏孔。
. X9 G& O' K2 @  `' i8 C4 V( `3、 将透析袋（纵长）与两极间的边线垂直放于电泳槽内电泳，4～5V/cm电泳至DNA贴紧袋壁。
  C$ [- z- ^5 J, S' d' z/ A- d4、 取出透析袋，挤出凝胶块，吸出袋内液体放入1.5ml的离心管内，10000rpm离心5min。
' n9 F6 U# J. P2 V+ P5、 吸出上清放入离心管内，加入等体积的饱和酚和等体积的氯仿，振荡混匀，10000rpm离心5min，吸出上清放入新的离心管内。
' ^- m' x5 d: g. y2 }6、 加入1/10体积的3mol/L AaAc,2倍体积预冷的无水乙醇，于-20℃放置4～5h。: H( P+ H8 `- t, j7 w  s
7、 于4℃，10000rpm离心15min，弃上清。- }, j! v3 s8 c
8、 用75%的酒精洗涤2次，每次均于4℃，10000rpm离心5min，弃上清。
$ l5 J9 i; e2 w9、 真空抽干，并用适量1×TE溶解沉淀。如此即得所需DNA片段。

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