DNA提取其他方法
* i4 q' [* x# a1 Z% T. B. [适用于PCR研究的快速提取法：2 A7 ?# ]5 c1 p, ]
试验步骤： ~" q% D! q, `0 T) n
1、 田间剪取植株新鲜叶片5－10mg（约2cm长）左右，新鲜叶片放于15ml离心管中，存于冰盒中，根据样品号贴上相应的标签。
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2、 用剪刀将叶片组织剪细（约0.5cm长）放在点穴式研板中。加入400μl DNA提取缓冲液，用玻棒将叶组织研细，直到液体变成深绿色即可。
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3、 加400μl DNA提取缓冲液，混合均匀，转入一新的15ml离心管（贴上相应的编号）。
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4、 加400μl氯仿，混合均匀后，2400转离心30s，将上清液转入一支新的15ml离心管（贴上相应的编号）。
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5、 加800μl无水乙醇，混匀，2400转离心3min。弃上清。70%乙醇冲洗，风干。用50μl TE缓冲液溶解，存于－20℃。取1μl用于PCR分析。
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Chelex-100法提取DNA：
1 R w; u/ d- x2 _试验原理：, N+ r5 }( q+ N1 r& U- {! B
Chelex-100是一种化学螯合树脂，由苯乙烯、二乙烯共聚体组成。含有成对的亚氨基二乙酸盐离子，对高价金属离子有很高的亲合力和螯合作用。在低离子强度、碱性及煮沸条件下，可以使细胞膜破裂，并使蛋白质变性，DNA游离。Chelex-100特别适用于微量生物样本的处理，方法简便快速，提取过程始终在同一管中进行，不用转移，可减少DNA的损失，操作步骤简化，减少了污染的机会。
( y9 h1 t8 d$ n以血液为例实验步骤：4 ^0 `2 H% m9 e% B
1、 取血液1-3?l，置1.5ml离心管中，加灭菌双蒸水1ml，振荡混匀，室温30min，或置冰箱-20℃ 5min。
7 U7 f4 n$ Q) d; z0 C3 ]3 ^( T2、 10000r/min离心5min，弃上清，反复2-3次。
5 b+ m; k3 |: a$ ~; Z' n4 x3、 于沉淀中加入200?l悬浮好的5%的Chelex-100溶液，56℃水浴2h或37℃水浴过夜。
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4、 振荡5-10秒，置100℃ 5-10min，取出振荡溶液5-10s。
2 X5 ?: o. n) H2 r0 T5、 10000r/min 5min，上清液即可作为PCR反应的DNA模板。
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注意事项：% a+ t7 S/ g k- Y: |% e
1、 Chelex-100处理模板仅适用于PCR反应，处理液不宜长期保存，如果保存的时间稍长，可将上清液转移至另一管中保存备用。一般在一周内使用，如果保存时间过长则会影响PCR扩增结果。
: m7 @# h& ^7 O; _& Z2、 在处理模板的各个步骤中，振荡要充分。
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3、 煮沸的温度、时间要充分，否则将影响扩增。
z& [- D6 v* e% @$ `% {4 { I9 Y4、 使用前要混匀离心，取上清液作为模板，如果PCR反应体系中含有Chelex-100，Mg2+会被螯合，降低酶活性，使PCR扩增失败。
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- E4 b% U6 ^0 l+ y4 d; q" O/ \% _& s) n硅珠法提取DNA：; [) @1 Z& r- @; u% V
试验原理：4 J M$ R* W: I! F
在高浓度的硫氰酸胍存在的条件下，DNA能够被二氧化硅特异性吸附，当没有硫氰酸胍存在时，DNA又可从二氧化硅中释放出来。硫氰酸胍是一种高性能的蛋白变性剂，可以使蛋白质与DNA充分分离，在硅珠吸附前高速离心可以将变性的蛋白质及一些不溶的物质除去。吸附后的漂洗过程则可将溶液中的PCR抑制物洗去。
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试验试剂：
( f5 J, [/ M+ ~( R1、 吸附剂：12g GuSCN溶于10ml 0.1mol/L Tris-HCl(pH6.4)，0.8ml 0.5mol/L EDTA，0.5ml TritonX-100。
& I/ C: X% b) ]3 i* K; w2、 漂洗剂：12g GuSCN溶于10ml 0.1mol/LTris-HCl(pH6.4)。
) l- x g/ O# D7 c S# F3、 硅珠悬浮液：0.06g Silica溶于1ml灭菌超纯水。
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4、 TES：1ml1mol/L Tris-HCl pH8.0，2ml 5mol/L NaCl，2ml 0.5mol/L pH8.0 EDTA，95ml灭菌超纯水。
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试验步骤：
0 m' p$ ^8 [4 d& x$ `5 W1 L1、 取1.5ml离心管1支，加入TES200ul，10%SDS40?l再加入血液2-4?l，混匀，煮沸5min。
6 L# F& h2 j- f& ?( Q: p. c2、 振荡混匀，加入300-600?l吸附液，混匀。
+ T% B$ a* z. W z8 Y8 b$ _$ ^# u3、 加入20-40?l硅珠悬浮液，振荡混匀，置室温15min，振荡5s，10000r/min离心2min。
7 p' {" W: c8 z5 X+ B9 R' V4、 除去上清，于沉淀中加入200-400?l漂洗液，充分悬浮沉淀物，10000r/min离心1min。
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5、 去上清液，重复漂洗一次，去上清后沉淀物用70%乙醇漂洗1－2次。10000r/min 5min。
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6、 去乙醇，置56℃ 10min，于沉淀中加入50-100?lTES，旋涡混合30s，56℃保温10min。
5 M- J9 }) I) r- E1 U* S; G7、 10000r/min离心10min，上清液可直接用于PCR反应。
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固相吸附法提取DNA：
: j7 J4 q) O2 q- Y0 g2 y试验原理：8 ^8 L5 g# J- L* _ d$ A
硫氰酸胍具有溶解细胞和灭活核酸酶的性质，利用当硫氰酸胍存在时硅藻颗粒能特异性吸附DNA，而当去除硫氰酸胍时，DNA又能从硅藻上释放出来的特性，来提取样本中的DNA。该方法尤其适用于临床标本的DNA提取。
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试验试剂：$ Z# T6 b% N/ h5 H; k, N8 c. o1 i6 c2 \
1、 裂解液：12g GuSCN，10ml 0.1mol/L Tris-HCl pH6.4，2.2ml 0.2mmol/L EDTA pH8.0，0.3ml TritonX-100。
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2、 洗涤液：12g GuSCN，10ml 0.1mol/L Tris-HCl pH6.4。
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试验步骤：
0 f5 U9 F$ w. L, h# h' @, m/ h1、 取100?l样品加900ul裂解液，20?l硅藻液，振荡混合，10000r/min离心1min，去上清。
- {0 |6 [' U9 y# w2、 加1ml洗涤液，悬浮沉淀洗涤，10000r/min离心1min，再重复一次。加1ml 70%乙醇洗一次，1ml丙酮洗一次，去上清，56℃ 10min。
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3、 加60?l TE缓冲液混匀，56℃ 10min，10000r/min离心5min，上清液备用。
