我要构建融合蛋白做原核表达，手头正好有pET22b和pET28a，因为我要扩增的片段上没有起始密码子和终止密码子，所以想请问这两种质粒有起始密码子和终止密码子吗，我是否要自己加一个起始密码子呢，这样我怕我翻译出来的蛋白会多一个甲硫氨酸。我看pET28a的图谱上有NcoI（CCATGG）和Nde I(CATATG)酶切位点里正好有ATG，我是否能用这个作为起始密码子呢，那这样我的酶切位点是不是也要选这两个酶切位点呢？
刚接触分子生物学，很多东西还在一点点琢磨，那个操作手册我也看不太明白，烦请大虾们耐心扫盲一下，不甚感激

中文版也看不懂？http://www.genecool.com/bbs/thread-14646-1-1.html
另外，不要重复发帖

我的意思是这样的：
我用pET28a构建融合蛋白，由于我要扩的这段融合基因没有ATG起始密码子，我看了pET28a的图谱，启动子后面的第一个ATG正好是NcoI酶切位点（CCATGG），那这个应该就是起始密码子了对吗？那如果我设计的上游引物酶切位点是EcoRI，那从NcoI到EcoRI的这一段载体的序列也会翻译到我的目的蛋白里吗，那这个问题怎么解决呢，对此我很迷惑，请老师们指教！！谢谢！！

pET28a中NcoI是最好的选择了，不过也会引入两个氨基酸，一个是ATG, 其后还有一个G,所以你还要补两个碱基，不然你的基因就移码了。另外，把终止密码子加在你的序列末端就行了。

[ 本帖最后由 xiaofeixia 于 08-8-31 15:37 编辑 ]

我看好多做融合蛋白的文章里都选的pET32a作为载体，请问我能选pET28作为TNFR-IgGFc融合蛋白的原核表达载体吗？有什么区别呢？