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[原核表达] 原核表达制备抗体


武林三国

原核表达制备抗体

最后的融合蛋白有可能成为包涵体,那么融合蛋白附带的6×his标签(不好去除)会影响结果吗,会对最后抗体制备有影响吗

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楼主,请问您做原核表达用的是pET系统的载体吗,有个小问题想请教您:
我要构建融合蛋白做原核表达,手头正好有pET22b和pET28a,因为我要扩增的片段上没有起始密码子和终止密码子,所以想请问这两种质粒有起始密码子和终止密码子吗,我是否要自己加一个起始密码子呢,这样我怕我翻译出来的蛋白会多一个甲硫氨酸。我看pET28a的图谱上有NcoI(CCATGG)和Nde I(CATATG)酶切位点里正好有ATG,我是否能用这个作为起始密码子呢,那这样我的酶切位点是不是也要选这两个酶切位点呢?  

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武林三国
没什么影响,多抗本来就是一个杂体系,你得到的抗体只是其中的很小一部分
单抗就更没什么问题了,反正你做筛选的
2楼的,不管你怎么做,都必须要有起始密码子和终止密码子,只要不移码,酶切位点里的可以用,终止密码子自己在引物上加
千万不要PM我问问题,因为我只是来做俯卧撑的。

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