谁帮我设计一下引物啊，自己设计的引物刚开始p出来，后面又p不出了，自己重新设计的引物不好用，实在没有办法了
引物序列：          gggggaggtc ttacggcggg ggttcatcca aaacatcaaa aaacaaacca caaacacaac
       61 atggtacaag attctccgac caccgtgtgc gtcaccggag ccgccggatt cattggctcg
      121 tggctcgtta tgaaacttct ccaacgcggc tacactgtcc gtgctactgt tcgtgacccc
      181 gggaacatga agaaagtgaa ccatttaata caactaccaa aagcaaaaac aaatttgaca
      241 ttatggaagg cagatttgac acaagaagga agttttgatg aagctattga aggttgccat
      301 ggggtgtttc atgtggccac ccctatggac tttgaatcca aggaccctga gaatgaaatc
      361 ataaagccaa caatagaagg ggtattaagc atcataagat catgtgtcaa agccaaaaca
      421 gtcaagaaac tggtgttcac ctcctctgcc gggaccgtaa acgtacaaga acatcaactt
      481 cccgtctaca acgagttgga ttggagcgat ttggacttca tctactccaa gaaaatgact
      541 gcttggatgt attttgtgtc gaaaacattg gcggaaaaag cagcatggga agcaacaaaa
      601 gaaaacaaca tcgagttcat cagcatcata ccaacgctag tcgttggtcc attcatcact
      661 ccttcgttcc caccaagcct cattaccgca ctttccttga tcaacggtgc agaatcacat
      721 tattcgatta taaaacaagg tcaatatgta catttggatg atctttgtga atgccatata
      781 tacttgtatg agaaccctaa agccaaagga agatacattt gttcttctca tgatgccacc
      841 attcatcaat tggcaagaat gatgaagaaa aagtggccag agtaccatgt tccaaatcag
      901 tttccgggga tcgataagga gccaccaatc gtttcgtttt cgtcgaagaa gttaaccgaa
      961 atgggttttg aatttaagta tgatttggag gacatgttta aaggagccat tgatagttgc
     1021 agagagaaag gattgcttcc atattccaca atcaagaatc ataagaaaga tgatcatatt
     1081 catgtttgat ctttttattc tatcaaaaac atttatgtct cattgtacta ataataaatc
     1141 tctctttaaa tctattgtaa gatttc

别人设计的你信得过吗？

用primer 5看了一下，结果不是特别理想，
（1）
5'  ACATCAACTTCCCGTCTA  3'  18bp，Tm 47.1 ，GC%44.4
5'  GGCTTTAGGGTTCTCATA  3'  18bp，Tm 47.1 ，GC%44.4
产物334bp，退火温度48.7

（2）
5'  ATCAACTTCCCGTCTACAA  3'  19bp，Tm 49.8 ，GC%42.1
5'  GAAAGTGCGGTAATGAGG  3'    18bp，Tm 50.7，GC%50.0
产物223bp，退火温度49.7

引物设计是很基本的技术，建议楼主在版内搜搜看，有很多帖子讲解的很详细。以后有什么问题欢迎多来讨论。

非常感谢，您帮我设计的第一对引物我已经合成过了，刚开始有特异性条带（用降落和梯度都有条带），但是后来就全是smear，阳性阴性对照都做了是好的，其他条件也都摸过，就是没有改变smear，实在找不出原因了；第二对引物我再分析下吧！

谢谢版主的教导，由于自己实验中的问题太多，所以常看论坛的帖子，学到了很多东西，可能不够自信吧，所以很少f说话，很佩服这里的牛人！

你目的都不清楚，怎么设计，看样子并不像是个CDS，但好像是个mRNA序列，你到底要扩哪一段？

水母雪莲DFR基因的mRNA序列，引物设计区域最好在350bp到900bp区域内，要用它扩增新疆雪莲DFR基因

可以找提供测序服务的公司帮你设计啊，他们有专业的分析软件，准确性比较高

晕，这么简单的事情就不要去找什么公司来做了
S:GGACTTTGAATCCAAGGACCC  Tm=59.9
A:TTATCGATCCCCGGAAACTG      Tm=59.9
扩增327-927，产物591bp
这次帮你，但建议你不要得过且过，设计引物是一项基本技术，不掌握就等于不要做分子
PS：建议你自己根据CDS设计引物，这样调基因不保险

谢谢！辛苦了 ！
1.恩，我知道了，引物设计软件有时不敢信，我把您帮我设计的放oligo里分析了……    向你们学习。
2.开始设计引物的时候就在想用mRNA还是CDS，后来blast了一下，觉得以mRNA设计引物可以不考虑内含子的影响，而且大部分区域在保守区域内，所以没有想通您的PS，能否解释一下？