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  • 引物设计疑问

    2008-05-09 22:44:43   /   PCR技术讨论

    我准备构建一个表达白介素受体蛋白的质粒，需要抽提受体蛋白编码的mRNA，再行RT-PCR,我上NCBI上找到该受体的mRNA序列，总共1809bp,编码蛋白的CDs从90到1469，共1380bp,我设计的引物就是直接拉CDs区，从90到1469，设计上下游引物，扩增CDs片断，参数如下，两引物有个交叉二聚体（一个技术老师说这个二聚体导致不能PCR成功，我我觉得有点武断啊，没办法，人家大啊，也不多解释）。那个技术老师自己弄弄priemer,从全长1809bp让软件自动找引物（我自己也找过，因为这个受体基因特殊，引物设计不理想，分值都偏低），找个89＋20（总长），1505－16的上、下游引物，还不是做巢式PCR设计的外引物，就打算.

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  • 求助：RT-PCR，扩增表达IL-7蛋白基因的引物怎么设计？

    2008-05-01 17:19:12   /   PCR技术讨论

    构建hIL-7真核表达载体，因此从组织中获取mRNA, RT-PCR,扩增出表达IL-7蛋白的目的基因片断，再酶切，与表达载体连接。思路如此，但我第一次设计引物，困难多多，还请各位高人指点！从genebank里面找到了hIL-7 mRNA的信息如下：CDS602..1135/gene="IL7"/note="IL7 nirs variant 6"/codon_start=1/product="interleukin 7 precursor"/protein_id="NP_000871.1"/db_xref="GI:4504677".

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